Диссертация посвящена исследованию влияния на пролиферацию клеток печени низкомолекулярных (10-14 кДа) белков цитозоля клеток печени. Эти белки являются термостабильными, не денатурируют при нагревании на водяной бане 85˚С 2 минуты. Количество этих белков в клетках печени интактных животных составляет 1,5 % от общего водорастворимого белка цитозоля (в среднем 0,62 мг на 1 г сырой массы печени). К пику синеза ДНК после частичной гепатэктомии количество низкомолекулярных термостабильных белков возрастает в 1,6 раза и постепенно снижается к шестым суткам после операции, достигая исходного уровня.
Низкомолекулярные (10-14 кДа) термостабильные белки являются быстросинтезирующимися белками, удельная радиоактивность составляет 2*104 импульсов в минуту на 1 мг белка, что на порядок выше, чем у тотального белка цитозоля. Скорость синтеза возрастает к пику синтеза ДНК после частичной гепатэктомии в 1,7 раза и остается на высоком уровне до шестых суток включительно.
Фракция низкомолекулярных термостабильных белков в ходе электрофореза в ПААГ с додецилсульфатом натрия разделяется на пять индивидульных белков. В процесе регенерации
16
печени на первые, третьи, шестые сутки после частичной гепатэктомии качественный состав низкомолекулярной термостабильной фракции не изменяется. Количественно возрастает содержание белка с молекулярной массой 14 кДа от 0,69% от суммарного количества белков фракции до 4,9% на первые и третьи сутки после после частичной гепатэктомии. На шестые сутки после частичной гепатэктомии, когда масса печени практически восстанавливается, содержание белка с молекулярной массой 14 кДа соответствует исходному уровню. Все пять белков входящие в состав низкомолекулярной термостабильной фракции, не содержат в своем составе углеводных компонентов.
При введении в организм животным меченные низкомолекулярные термостабильные белки обнаруживаются в сыворотке крови печени и почках уже через 15 минут после введения. Исследуемые белки локализуются преимущественно в почках и печени, с максимумом содержания метки к трем часам после введения. В сердце, легких и селезенке одинаково низкий уровень метки остается на протяжении 12 часов после введения.
Низкомолекулярные термостабильные белки, связываясь с клетками печени, преимущественно локализуются в цитозоле и ядрах клеток печени.
При внутрибрюшинном введении животным после индукции регенерации печени низкомолекулярные термостабильные белки способны изменять скорость синтеза ДНК в клетках печени. В дозах 0,01 и 0,1 мг на 100 г массы животного низкомолекулярные термостабильные белки увеличивают скорость синтеза ДНК по сравнению с контрольным уровнем. В дозах 0,3; 0,6; 4,0 мг на 100 г массы животного низкомолекулярные термостабильные белки снижают скорость синтеза ДНК более чем в два раза.
Показано, что ингибирующий эффект низкомолекулярных термостабильных белков зависит от времени введения. Образец белков вводили в ранней G1 фазе, т.е. через 4 часа после частичной гепатектомии, в конце G1 начали S фазы клеточного цикла, т.е. через 14 часов после частичной гепатектомии. Низкомолекулярные термостабильные белки, введенные внутрибрюшинно в дозе 4 мг на 100 г массы животного, через 4 часа после частичной гепатектомии снижали удельную радиоактивность ДНК в 2 раза по сравнению с животными не получавшими эти белки. Введение белков в этой же дозе через 14 часов после частичной гепатектомии не изменяло скорость включения меченых предшественников в ДНК клеток печени.
Внутрибрюшинные введения низкомолекулярных термостабильных белков не оказывают достоверного влияния на скорость синтеза цитоплазматической и ядерной фракции РНК клеток печени, независимо от времени и дозы введения.
17
Ключевые слова: клетки печени, гепатэктомия, низкомолекулярные термостабильные белки, пролиферация.
ABSTRACT
Shmonin A.V. Extraction of low molecular weight thermostable cytosol proteins and investigation of their effect on liver cells prolifiration. – Manuscript.
Thesis for a candidate’s degree by speciality 00.03.04 – biochemistry. – Kharkov State University of Ministry of education of Ukraine.
The dissertation is devoted to investigation of the effect of low molecular weight (14 kDa) liver cells cytosol proteins on the liver cells proliteration.
The proteins are thermostable and their content are liver cells 0,62 mg for mg of the liver weight. Till DNA synthesis’s in the liver cells after the partial hepatectomy the proteins content increased 1,6 times and their synthesis rate increased 1,7 times comparing to the intact animals. Till 6th day after the operation the content of the proteins approximates to the original level. It was shown that under intraperitoneal infection of the low molecular weight thermostable proteins they after 15 min could be discovered in the serum and mainly localized in the liver and kidneys. In the liver cells these proteins became localized in the cytosol and nuclears. Devoting thermostable proteins (10-14 kDa) increase the rate of the DNA synthesis in the cells of the regenerating liver in doses 0,01 and 0,1 mg/100g animal’s mass and inhibit this process by greater dose (0,3; 0,6; 4 mg/100g).
The effect of the inhibition has been revealed under the influence of the proteins on the liver cells in the early G1 phase of the cell’s cycle.
Key words: liver cells, hepatectomy, low molecular weight thermostable proteins, proliferation.
| 
