На підставі системи розрахунків одержали наступне рівняння регресії:
у = 3,59699 + 0,00852х1 + 0,00312х2 + 0,16243х3 – 0,00164х1х2 – 0,0509х1х3
+ 0,00634х2х3
Рівняння дає уявлення про кількісний вплив кожного фактору на вихід екстрактивних речовин в процесі екстракції і показує можливість управління цим процесом.
З метою економії екстрагенту і часу виробництва препарату в ході подальших технологічних досліджень конкретизовані умови вилучення і встановлений оптимальний режим екстрагування сировини за методом крутого сходу по поверхні відгуку з використанням отриманого лінійного рівняння (табл.5).
Значення Урозр., отримане за рівнянням регресії, практично відповідає експериментальним даним (табл.4). На першому ж кроці отримано значення виходу Уексп.=4,2328, яке на 2,3% вище максимального виходу цільового продукту, досягнутого при постановці експерименту за планом. Подальше збільшення кількості зливів і часу настоювання практична не приводить (0,2-0,3%) до збільшення виходу екстрактивних речовин.
Виходячи з отриманих даних, встановлені наступні оптимальні умови вилучення екстрактивних речовин з листя горіху грецького: співвідношення сировина:готовий продукт – 1:5, час настоювання – 48 годин, кількість зливів – 3.
Таблиця 5
Кроки крутого сходу оптимізації процесу екстракції
На підставі цих параметрів розроблена технологія приготування НЛГГ, що включена до промислового регламенту виробництва настойки. Технологічна схема виробництва НЛГГ наведена на рис.4.
Вивчення властивостей і розробка методик аналізу НЛГГ.
З метою оцінки та контролю якості розробленої настойки нами вивчені її органолептичні та фізико-хімічні показники.
Враховуючи хімічний склад рослинної сировини та біологічну активність настойки, запропоновані методики якісних реакцій, що підтверджують наявність поліфенольних сполук (реакція з спиртовим розчином заліза окисного хлориду – сірувато-зелене забарвлення) та кислоти аскорбінової (реакція з розчином натрію 2,6-дихлорфеноліндофеноляту – зникнення синього забарвлення). Ідентифікацію флавоноїдів проводили методом ТІІІХ з використанням стандартних зразків речовин-свідків (СЗРС) кверцетину та гіперозиду. На хроматограмі досліджуваної настойки при денному світлі виявили плями жовтувато-коричневого кольору на рівні плям на хроматограмі розчину СЗРС гіперозиду і розчину СЗРС кверцетину.
Рис. 4. Блок-схема технологічного процесу одержання
настойки листя горіху грецького
При огляді в ультрафіолетовому світлі при довжині хвилі 366 нм плями гіперозиду виявляються у вигляді темних плям зеленувато-жовтого кольору, плями кверцетину – жовтувато-коричневого (рис.5).
Рис. 5.Схема хроматограми НЛГГ, де
1 – дослідний розчин НЛГГ;
2 – модельна суміш СЗРС гіперозиду і кверцетину;
3 – СЗРС гіперозиду;
4 – СЗРС кверцетину.
Враховуючи те, що діючими речовинами, які забезпечують біологічну активність НЛГГ, є флавоноїди та дубильні речовини, з метою контролю якості настойки розроблені методики кількісного визначення флавоноїдів та дубильних речовин в готовому продукті.
Для кількісного визначення дубильних речовин за основу взятий метод окисно-відновного титрування розчином калію перманганату. 3 метою уникнення впливу ефірних олій, жирних органічних кислот, парафінів, смол та інших речовин на результати визначення була проведена попередня підготовка НЛГГ – трикратне екстрагування хлороформом. Різні серії настойки містять 0,32-0,36% дубильних речовин в перерахунку на танін. Пряме титрування розчину настойки дає завищені результати на 5%.
Для кількісного визначення флавоноїдів використовували спектрофотометричний метод. Для отримання оптимальних результатів проводили екстракцію флавоноїдних сполук в н-бутанолі з наступним упарюванням об'єднаних бутанольних вилучень до сухого залишку і розчиненням в 40% спирті. Гіперозид використовували як стандартний зразок.
Враховуючи те, що спектри поглинання розчинів настойки та гіперозиду ідентичні, максимум поглинання спостерігається при довжині хвилі 410 нм, форма кривих спектрів співпадає, вимір оптичної густини комплексу флавоноїдів з алюмінію хлоридом проводили при довжині хвилі 410 нм. Встановлено, що різні серії настойки містять 0,28-0,34% флавоноїдів в перерахунку на гіперозид.Таблиця 6
Фізико-хімічні властивості настойки листя горіху грецького
Примітка. n = 5.
Таблиця 7
Результати вивчення стабільності настойки листя горіху грецького в процесі зберігання
при температурі 12-15 оС
Результати визначення фізико-хімічних властивостей різних серій настойок листя горіху грецького наведені в табл. 6.
Для дослідження стабільності препарату в процесі зберігання, різні серії настойок у флаконах з оранжевого скла закладені на зберігання згідно вимог ДФ СРСР ХІ вид. (табл. 7).
У результаті проведених досліджень експериментально доведена стабільність НЛГГ на протязі 15 місяців з урахуванням основних показників якості настойки. Це дозволило рекомендувати як первинну упаковку для настойки - флакони із оранжевого скла, а також умови зберігання – в прохолодному, захищеному від світла місці, які забезпечують стабільність препарату на протязі 1 року.
На підставі проведених досліджень розроблено ТФС на настойку листя горіху грецького, яка регламентує її якість за вказаними органолептичними та фізико-хімічними показниками.
Вивчення біологічних властивостей НЛГГ.
Результати вивчення специфічної активності НЛГГ на моделях гістамінового, каолінового та карагенінового запалення свідчать про виражений протизапальний ефект, який на фазі альтеративного запалення наближається до активності препарату порівняння ортофену (табл.8).
Таблиця 8
Протизапальна активність настойки листя горіху грецького
Встановлена ранозагоююча дія настойки вища за активність обліпихової олії. Протизапальні, ранозагоюючі та антимікробні властивості НЛГГ дають можливість припустити наявність противиразкової дії. 3 метою попереднього дослідження противиразкову активність визначали на моделі адреналінового ураження шлунку лабораторних тварин. Результати досліджень свідчать про виражену противиразкову дію, що перевищує активність плантаглюциду, який використовували як препарат порівняння (табл.9).
Таблиця 9
Противиразкова дія настойки листя горіху грецького на моделі
адреналінового ураження шлунку
Примітка. Ві – виразковий іидекс, розраховаиий за формулою: , де
С – кількість виразок або ерозій;
Т – число тварии з виразками-ерозіями.
Експериментальною оцінкою гострої та хронічної токсичності на лабораторних тваринах доведена нешкідливість препарату.
ВИСНОВКИ
- Теоретично доведена доцільність створення лікарської форми на основі нової рослинної сировини – листя горіху грецького.
- Фізико-хімічними, технологічними і біологічними дослідженнями науково обгрунтовані технологія та методики контролю якості НЛГГ, призначеної для лікування хронічного гастриту, виразкової хвороби шлунку та 12-типалої кишки. Доведено, що оптимальним екстрагентом являється 40% спирт етиловий, оптимальне співвідношення сировина: готовий продукт – 1:5.
- За допомогою методу математичного планування експерименту з застосуванням статистичної графічної системи STATGRAPHICS Plus for Windows науково обгрунтована та оптимізована технологія НЛГГ, яка передбачає використання методу дробної мацерації з часом настоювання 48 годин, кількістю зливів – 3, через кожні 12 годин. Дана технологія була покладена в основу технологічного та технічного промислових регламентів виробництва НЛГГ, які впроваджені на АТ "Ефект".
- Вивчені органолептичні та фізико-хімічні показники настойки: зовнішній вигляд, колір, запах, сухий залишок, вміст спирту, мікробна чистота, важкі метали. Доведено, що НЛГГ відповідає вимогам ДФ ХІ.
- Розроблені методики якісного та кількісного визначення діючих речовин в настойці. Доведена стабільність препарату в процесі зберігання при температурі 12-15?С у флаконах з оранжевого скла протягом 1 року, на підставі
чого розроблено та затверджено ТФС 42У-135/162-843-98 "Настойка листя горіху грецького".
- Біологічними дослідженнями виявлений виражений протизапальний, ранозагоюючий та противиразковий ефект настойки, нешкідливість препарату підтверджена результатами вивчення гострої та хронічної токсичності на лабораторних тваринах.
- Нормативно-технічна документація на настойку листя горіху грецького та інші матеріали представлені до Фармакологічного комітету МОЗ України. Отримано дозвіл на проведення першої фази клінічних випробувань запропонованої лікарської форми (протокол №6 від 25.06.98 р.).
- Фрагменти роботи впроваджені в учбовий процес ряду вузів України.
Тема дисертації відображена в публікаціях:
- Изучение противовоспалительной активности жидкого зкстракта из листа ореха грецкого /Л.Г.Савченко, О.И.Набока, Л.С.Петровская, Н.П.Киселева// Лекарства – человеку: Сб. научн. тр. – Москва, 1998. – Т. VII. – С.202-204.
- Фітотерапія грибкових захворювань / О.Г. Башура, В.С. Казакова, Н.П. Кісельова, Л.С. Петровська, Т.М. Ковальова, І.І. Баранова //Ліки. – 1998. №5. – С.56-64.
- Вивчення безпеки настойки листя горіха грецького / О.І.Яловенко, Н.П.Кісельова, В.С.Казакова, Л.С.Петровська // Клінічна фармація. – 1998. – Т.2. - №3. – С.92-94.
- Технологічні аспекти створення настойки листя горіху грецького /В.С.Казакова, Н.П.Кісельова // Вісник фармації. – 1998. - № 2 – С.72-74.
- Фізико-хімічне вивчення настойок листя горіху грецького / Л.Д.Грицан, О.Г.Башура, В.С.Казакова, Н.П.Кісельова // Вісник фармації. – 1998. - № 2 – С.81-83.
- Вивчення антимікробної активності екстракту листя грецького горіху / Н.П.Половко, В.В.Просвірнін, О.Г.Башура // Сучасні проблеми фармації: Тез. доп. респ. наук.-практ. конф., Харків, 1994. – С.82.
- Морфолого-анатомічні ознаки листя горіху грецького / Л.М.Сіра, Н.П.Половко, Л.С.Петровська // Проблеми ботаніки і мікології на порозі третього тисячоліття: Мат. Х з'їзду Укр. бот. тов., 22-23 травня 1997. – Київ – Полтава. – С.153-154,
- Перспективы использования листа ореха грецкого в практической медицине /Л.С.Петровская, Н.П.Киселева // Актуальные проблемы и основные направления развития профилактической науки и практики: Тез. докл. обл. научн.-практ. конф., Харьков. - 1997. – С. 46-48.
- Растительное сырье как источник биологически активных веществ для парфюмерно-косметических препаратов /Л.С.Петровская, Л.М.Серая, Н.П.Киселева, В.С.Казакова // Нетрадиционное растениеводство, экология и здоровье: материалы 7-й междун. научн.-практ. конф., 7-13 сентября 1998 г. – Симферополь, 1998. – С.737.
Кісельова Н.П. Розробка складу і технології настойки листя горіху грецького. – Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеню кандидата фармацевтичних наук за спеціальністю 15.00.01 – технологія ліків та промислова фармація. – Українська фармацевтична академія, Харків, 1998.
Вперше проведено комплексне дослідження по створенню настойки на основі лікарської рослинної сировини – листя горіху грецького, призначеної для лікування хронічних гастритів та виразкової хвороби шлунку.
Розроблений склад та раціональна технологія настойки, вивчені фізико-хімічні властивості препарату, стабільність у процесі зберігання, біологічна активність.
Ключові слова: листя горіху грецького, настойка, технологія.
Киселева Н.П. Разработка состава и технологии настойки листа ореха грецкого. – Рукопись.
Диссертация на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук по специальности 15.00.01 – технология лекарств и промышленная фармация. – Украинская фармацевтическая академия, Харьков, 1998.
Впервые проведено комплексное исследование по созданию настойки на основе нового лекарственного растительного сырья – листа ореха грецкого, предназначенной для лечения хронических гастритов и язвенной болезни желудка.
Разработан состав и рациональная технология настойки, изучены физико-химические свойства препарата, стабильность в процессе хранения, биологическая активность.
Ключевые слова: лист ореха грецкого, настойка, технология.
Kiselova N.P. Development of composition and technology of the tincture of leaf walnut. – Manuscript.
The thesis for Master's Degree in Pharmacy in Speciality 15.00.01
Technology of Drugs and industrial Pharmacy; Ukrainian Academy of Pharmacy, Kharkov, 1998.
The cultivation of compound and technology of the tincture of leaf walnut. First it has been carried out complex investigation on creation of the tincture on the basis of new medical – leaf walnut, recommended for the treatment of chronic gastritis. It has been worked out an compound and the rational technology of the tincture, studied the physico-chemical process of keeping, the biological activity.
Key words: leaf walnut, tincture, technology.
Підписано до друку 8 грудня 1998 р. Формат 60х90/16
Тираж 100 прим. Замовлення № 134
Поліграфічне ПП Алістратова
310072, м. Харків, просп. Леніна, 52, кв. 16
| 
