|
К И Ї В С Ь К И Й Н А Ц І О Н А Л Ь Н И Й У Н І В Е Р С И Т Е Т імені Т А Р А С А Ш Е В Ч Е Н К А
ФУНКЦІОНАЛЬНА АКТИВНІСТЬ СИСТЕМИ РЕЦЕПТОРНИХ ТИРОЗИНОВИХ ПРОТЕЇНКІНАЗ У ЛІМФОЦИТАХ СЕЛЕЗІНКИ ЩУРІВ ЗА УМОВ РАДІАЦІЙНОГО ВПЛИВУ
03. 00. 04 – біохімія
А В Т О Р Е Ф Е Р А Т
дисертації на здобуття наукового ступеня
кандидата біологічних наук
КИЇВ - 2000
Дисертацією є рукопис
Робота виконана в лабораторії фізико-хімічної біології кафедри біохімії біологічного факультету Київського національного університету імені Тараса Шевченка.
Захист дисертації відбудеться “29”червня 2000 р. о 10 год. на засіданні спеціалізованої вченої ради Д26.001.24 в Київському національному університеті імені Тараса Шевченка за адресою: 03127, м. Київ, пр-т Глушкова, 2, корпус 12 (біофак), ауд. 215.
Поштова адреса: 01033, Київ, вул.Володимирська, 64, спецрада Д 26.001.24, біологічний факультет.
З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці університету: 01033, Київ, вул.Володимирська, 58.
Автореферат розісланий “29” травня 2000 р.
СПИСОК ПРАЦЬ, ОПУБЛІКОВАНИХ ЗА ТЕМОЮ ДИСЕРТАЦІЇ
- Томачинська Л. І., Долішняк О. І., Кірпенко Т. О. Са2+, кальмодулінзалежні протеїнкінази лімфоцитів селезінки щурів: особливості виділення та властивості // Вісник КУ. – 1998, № 27. – С.18-20.
- Остапченко Л. І., Нальовіна О. Є., Кірпенко Т. О. Автофосфорилювання сGMP-залежних протеїнкіназ із лімфоцитів селезінки щурів // Вісник КУ. – 1998, №27. – С. 23-25.
- Кірпенко Т. О., Остапченко Л. І., Кучеренко М. Є. Вплив випромінювання на активність тирозинових протеїнкіназ в лімфоїдних клітинах селезінки та тимусу щурів // Доповіді НАН України. – 1999, № 6. – С. 173-176
- Кірпенко Т. О., Остапченко Л. І., Шаповал І.М. Вивчення фосфорилювання білкових субстратів тирозиновими протеїнкіназами лімфоцитів селезінки щурів під впливом променевого й онкологічного факторів // Вісник КУ. – 1999, №29. – С.32-34.
- Остапченко Л. І., Нальовіна О. Є., Долішняк О. І., Кірпенко Т. О. Дослідження властивостей Са2+, кальмодулінзалежної протеїнкінази лімфоцитів селезінки щурів // VІІ Український біохімічний з’їзд. - Київ. - 1997. – С. 183.
- Остапченко Л. И., Нальовина О. Е., Кирпенко Т. О. Влияние рентгеновского облучения в дозах 0,5 и 1 Гр на регуляцию активности циклонуклеотид- и кальцийзависимых протеинкиназ из лимфоцитов селезёнки крыс // ІІІ съезд по радиационным исследованиям. Москва. - 1997. – С.124-125.
- Кірпенко Т. О., Остапченко Л. І., Остапченко С. Г., Нальовіна О. Є. Вивчення впливу випромінювання на конформаційний стан систем фосфорилювання лімфоцитів селезінки // ІІ з’їзд українського біофізичного товариства. Харків. - 1998. – С. 3с.
- Kirpenko T. O., Nalovina O. E., Ostapchenko L. I. Tyrosine Protein Kinase activity in lymphoid cells of spleen and thymus under the influence of X-ray irradiation // ISREC Conference “Cancer and the cell cycle”. Switzerland. – 1999. – P.46.
- Kirpenko T. O., Nalovina O. E., Ostapchenko L. I. Possible causes of tyrosine protein kinase activity disruption in lymphoid cells of thymus under the influence of X- ray irradiation in low doses // UICC Advanced Course on Cell Signaling and Cancer. Sweden. – 1999. – P.119.
- Kirpenko T. O., Nalovina O. E., Ostapchenko L. I. The changes in autophosphorylation degree of EGF receptor Tyrosine Protein kinase from spleen lymphocytes under the influence of X-ray irradiation and downstream signaling events // Gordon Research Conference. Singapore. - 1999. – Р.24.
А Н О Т А Ц І Я
Кірпенко Т. О. Функціональна активність системи рецепторних тирозинових протеїнкіназ у лімфоцитах селезінки щурів за умов радіаційного впливу. – Рукопис.
Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.04 – біохімія. – Київський національний університет імені Тараса Шевченка, Київ, 2000.
Узагальнено результати вивчення функціонування ЕРФ - рецепторних тирозинових протеїнкіназ у лімфоцитах селезінки щурів за умов радіаційного впливу. Встановлено порушення активуючого ефекту епідермального ростового фактора на активність рецепторних тирозинових протеїнкіназ після дії рентгенівського випромінювання в дозі 1 Гр, яке супроводжується зміною взаємодії ферменту з субстратом фосфотрансферазної реакції – АТР. При цьому спостерігається інтенсифікація процесу автофосфорилювання ЕРФ-рецепторних тирозинових протеїнкіназ, що обумовлено виникненням дисбалансу в функціонуванні системи рецепторних тирозинових фосфатаз. сАМР-залежне фосфорилювання є залученим до реалізації внутрішньоклітинних ефектів радіоіндукованої активації ЕРФ-рецепторних тирозинових протеїнкіназ в лімфоцитах селезінки.
Ключові слова: цитокіни, рецепторні тирозинові протеїнкінази, протеїнфосфатази, рентгенівське випромінювання, лімфоцити селезінки.
А Н Н О Т А Ц И Я
Кирпенко Т. О. Функциональная активность системы рецепторных тирозиновых протеинкиназ в лимфоцитах селезёнки крыс в условиях радиационного воздействия. – Рукопись.
Дисcертация на соискание научной степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.04 – биохимия. – Киевский национальный университет имени Тараса Шевченко, Киев, 2000.
Обобщены результаты изучения функционирования ЕРФ - рецепторных тирозиновых протеинкиназ в лимфоцитах селезёнки крыс в условиях радиационного воздействия. Выявлено нарушение активирующего эффекта ЕРФ на активность рецепторных тирозиновых протеинкиназ после действия рентгеновского излучения в дозе 1 Гр, которое сопровождается изменением взаимодействия фермента с субстратом фосфотрансферазной реакции – АТР. При этом наблюдается интенсификация процеса автофосфорилирования ЕРФ-рецепторных тирозиновых протеинкиназ, что обусловлено возникновением дисбаланса в функционировании системы рецепторных тирозиновых фосфатаз. В реализации внутриклеточных эффектов радиоиндуцированной активации ЕРФ-рецепторных тирозиновых протеинкиназ в лимфоцитах селезёнки принимает участие сАМР-зависимое фосфорилирование.
Ключевые слова: цитокины, рецепторные тирозиновые протеинкиназы, протеинфосфатазы, рентгеновское излучение, лимфоциты селезёнки.
A N N O T A T I O N
Kirpenko T. O. The functioning of receptor tyrosine protein kinase’s system in rat spleen lymphocytes under the influence of X-ray radiation.
Dissertation for the obtaining of the scientific degree of the specialized in 00.03.04 – Biochemistry, Taras Shevchenko Kyiv national university. Kyiv, 2000
The Epidermal Growth Factor Receptor (EGF-R) has been shown to play a crucial role in radio-induced signaling response in rat spleen lymphocytes. The results of study of EGF receptor tyrosine protein kinase’s functioning in rat spleen lymphocytes under the influence of X-ray radiation have been summarized. The 2-fold increase of its Tyrosine Protein kinase domain activity under the influence of X-ray irradiation in dose of 1 Gy has been established. At the same time there is no statistically significant alteration in the level of enzyme activity after irradiation of rats in dose of 0.5 Gy. However, we have also determined a partial reduction of EGF stimulating action on its receptor Tyrosine kinase activity in conditions of irradiation. To clarify a reason of hyper-activation of ЕGF-R Tyrosine kinase we have carried out partial purification procedures with using the antiphosphotyrosine antibodies and then valued the autophosphorylation rate of this enzyme by autoradiography and kinetic analysis. These data reveal the significant intensification of EGF-R tyrosine kinase autophosphorylation in combining with a decreased binding constant of autophosphorylated enzyme to ATP under the influence of X-ray irradiation in dose of 1 Gy. Although, kinetic analysis of enzyme interaction with a various exogenous substrates performed by us earlier has not shown a disruption on the level of enzyme-substrate association under the influence of X-ray irradiation.
The post-radiation intensification of EGF-R tyrosine kinase autophosphorylation in combining with a decreased binding constant of autophosphorylated enzyme to ATP could suggest a protein phosphotase system involvement in radiation-induced signaling of EGF and its receptor. As a result of performed research we established a decrease of EGF-R phosphatases activity in conditions of radiation. For instance, the irradiation in dose of 1 Gy leads up to 2-fold inactivation of EGF-R phosphatases. The influence of X-ray irradiation in dose of 0.5 Gy is characterized by the same type effect.
Consequently, the above mentioned hyperphosphorylation of EGF-R tyrosine protein kinase in spleen lymphocytes of rats irradiated in dose of 1 Gy could be considered like a result of partial phosphatase inactivation. Apparently, this event in turn provokes the increased number of phosphorylated residues within EGF-R, which have been shown to play a role of adapter sites in interaction with downstream signaling molecules. In this way it is appeared the probability of potentiation of EGF-R tyrosine kinase trigger molecules.
Obviously, the above mentioned disruptions might result in alteration of downstream signaling pathways, which include activation of distinct Protein kinases. As a result of examination of intracellular Protein kinases activities (cAMP-, cGMP-, Ca2+/phoshpolipid- and Calmodulin-dependent Protein kinases) after spleenocytes stimulation by EGF we have observed a significant increase of cAMP-dependent Protein kinase activity in control rats, while it has been reduced under the influence of X-ray irradiation in dose of 1 Gy.
After performed researches we suggest that cytosolic cAMP-dependent Protein kinase participates in radio-induced signal transduction pathways through EGF and its receptor in rat spleen lymphocytes and it is accompanied by EGF-R Tyrosine kinase domain hyperautophosphorylation.
Thus, EGF-R tyrosine protein kinases are involved in radiation-induced response of immune competent spleen cells and mediate the effects of EGF signal transduction in these cells in 12 hours after rat’s irradiation in dose of 1 Gy.
Key words: cytokines, receptor tyrosine protein kinases, protein phosphatases, X-ray radiation, spleen lymphocytes.
| 
