Электронная библиотека Веда
Цели библиотеки
Скачать бесплатно
Доставка литературы
Доставка диссертаций
Размещение литературы
Контактные данные
Я ищу:
Библиотечный каталог российских и украинских диссертаций

Вы находитесь:
Диссертационные работы России
Биологические науки
Молекулярная биология

Диссертационная работа:

Друцкая Марина Сергеевна. Роль фактора некроза опухолей в поддержании гемопоэза у мышей : Дис. ... канд. биол. наук : 03.00.03 Москва, 2006 76 с. РГБ ОД, 61:06-3/649

смотреть содержание
смотреть введение
Содержание к работе:

Список сокращений 4

Введение 6

Обзор литературы

Кроветворная система: устройство и регуляция 9

Семейство ФНО: цитокины-лиганды и их рецепторы 16

Молекулярные механизмы передачи сигнала 19

Физиологическая роль ФНО в гемопоэзе 21

Изучение кроветворения у мышей, дефицитных по рецепторам ФНОР1 иФНОР2 27

Применение ФНО-блокаторов в медицине 28

Материалы и методы исследований

Мыши 31

Генетическое типирование мышей 32

Получение клеточных взвесей 33

Проточная цитометрия 34

Препаративная проточная цитометрия 35

Длительные культуры костного мозга 36

Культивирование клеток костного мозга в присутствии ростовых факторов 37

Метод экзогенных селезеночных колоний 37

Культуры клеток-предшественников гранулоцитов и макрофагов и полипотентных миелоидных клеток-предшественников 38

Культуры эритроидных клеток-предшественников 39

Получение костно-мозговых химер для опыта по конкурентной репопуляции 39

Статистический анализ 40

Результаты и обсуждение ФНО как ингибитор миелопоэза in vitro 41

Роль ФНО в регуляции пролиферации и дифференцировке тучных клеток 44

Минимальные аномалии в кроветворении у ФНО-дефицитных мышей 46

ФНО - ингибитор ранних (КОЕ-с) и коммитированных кроветворных клеток предшественников (КОЕ-гм) in vivo 48

Нарушенная динамика гемопоэза у мышей с комбинированным ФНО/ЛТ дефицитом 52

У мышей с комбинированным ФНО/ЛТ дефицитом повышено количество СКК в костном мозге 58

Заключение 61

Выводы 62

Список литературы 64

Благодарности 76  

Введение к работе:

Изучение молекулярных основ процессов, связанных с регуляцией гемопоэза, является одним из важнейших вопросов современной молекулярной биомедицины. Процессы регуляции кроветворения чрезвычайно сложны, т.к. должны обеспечивать адекватный ответ на потребности организма в различных клеточных элементах на протяжении всей его жизни. Гемопоэтическая система представляет собой совокупность клеточных популяций от наиболее примитивных плюрипотентных стволовых кроветворных клеток до зрелых клеток крови, каждая из которых обладает определенным пролиферативным потенциалом и выполняет специализированные функции. Стабильное кроветворение обеспечивается за счет постоянной продукции зрелых клеток крови. Известно, что ежедневный оборот клеток в кроветворной системе взрослого человека составляет около 1x10 клеток. Такая количественная регуляция гемопоэза осуществляется на уровне коммитированных, т.е. «определившихся» в типе дифференцировки, клеток-предшественников, утративших способность к длительному самоподдержанию и полипотентность. Регуляция отдела плюрипотентных стволовых кроветворных клеток, обеспечивающих неистощаемость кроветворения на протяжении всей жизни организма, осуществляется локально стромальным микроокружением. Тем самым, регуляция гемопоэза у млекопитающих осуществляется на двух принципиально разных уровнях. В настоящее время охарактеризовано большое количество сигнальных молекул, действующих через клеточные рецепторы и участвующих в регуляции пролиферации и дифференцировки коммитированных кроветворных клеток-предшественников соответствующих рядов кроветворения, т.е. обеспечивающих количественную регуляцию гемопоэза. Однако молекулярные механизмы процессов, связанных с регуляцией стволовых кроветворных клеток, до сих пор остаются мало изученными. В течение многих лет исследователи занимаются изучением физиологической роли цитокинов, участвующих в регуляции жизненно важных для организма процессов, таких как иммунный ответ, гомеостаз, морфогенез и гемопоэз. Известно, что цитокины являются медиаторами этих процессов и на молекулярном уровне обеспечивают взаимодействие клеток различных тканей и органов между собой, что является неотъемлемым условием функционирования целого организма. Одним из таких цитокинов является фактор некроза опухолей (ФНО), который был впервые описан как белковый фактор, вырабатываемый макрофагами в ответ на стимуляцию бактериальным эндотоксином, активность которого способна приводить к геморрагическому некрозу опухолей на экспериментальных моделях (Carswell et al. 1975; Old 1988). Однако дальнейшие исследования показали, что ФНО обладает множеством физиологических активностей. Такая плейотропность ФНО, в первую очередь, связана с тем, что спектр клеток организма, способных экспрессировать ФНО или его рецепторы ФНОР1/р55 и ФНОР2/р75, а также родственные им молекулы (лиганды ЛТа, ЛТр, LIGHT и рецептор ЛТрР), чрезвычайно широк. Изучение мышей с генетической инактивацией ФНО убедительно продемонстрировало исключительную важность ФНО для защиты организма. В частности, стало ясно, что ФНО является важнейшим медиатором иммунного ответа и воспаления, а также участвует в формировании и поддержании структуры вторичных лимфоидных органов. Известно, что повышенный уровень ФНО в сыворотке крови часто ассоциируется с патофизиологией некоторых инфекционных и аутоиммунных заболеваний, а также септического шока. В настоящее время препараты, системно блокирующие действие ФНО, широко применяются в лечении ревматоидного артрита, болезни Крона, анкилозирующего спондилеза (окостеняющего воспаления позвоночника) и некоторых других аутоиммунных заболеваний. В последние годы активно разрабатываются клинические протоколы по применению ФНО-блокаторов при лечении миелодисплазий. Однако у небольшой части пациентов, находящихся на анти-ФНО терапии, наблюдаются серьезные побочные эффекты, связанные с подавлением функций иммунной системы. В связи с этим, актуальным остается вопрос об установлении всех физиологических функций ФНО в контексте целого организма.

Большой интерес представляет изучение роли ФНО в регуляции гемопоэза. Известно, что некоторые цитокины способны оказывать преимущественно стимулирующее или ингибирующее воздействие на определенную популяцию кроветворных клеток. Как оказалось, плейотропность ФНО определяет более сложный характер его воздействия на гемопоэтические клетки. В частности, исследования в культуре с добавлением экзогенного ФНО продемонстрировали его роль в качестве бифункционального регулятора гемопоэза in vitro. При этом характер воздействия ФНО на гемопоэтические клетки in vitro обусловлен стадией дифференцировки клеток в культуре, наличием таких ростовых факторов как ИЛ-3, ФСК, ГМ-КСФ и др., а также количественным содержанием самого ФНО. Однако результаты таких исследований позволили лишь косвенно судить о физиологической роли ФНО в гемопоэзе in vivo, вследствие чего и возникла необходимость проведения дополнительных исследований на генетически модифицированных мышах. Исследования с культурами костного мозга, полученного от ФНО-дефицитных мышей, свидетельствуют об ингибируїощей роли ФНО в миелопоэзе как на уровне гранулоцитарно-макрофагальных клеток-предшественников так и на уровне зрелых клеток в культуре (Дризе и др. 2000; Друцкая и др. 2001; Drutskaya et al. 2005). Одним из механизмов такого ингибирования предположительно является опосредованная ФНО через ФНОР1 индукция апоптоза (Нифонтова и др. 2003).

Целью данного исследования было выявление физиологической роли ФНО в гемопоэзе in vivo и in vitro, а также решение вопроса о возможной «вырожденности» гемопоэтических функций ФНО и ЛТос за счет передачи сигнала через одни и те же рецепторы. Для разрешения этого вопроса исследования проводили на уникальной панели мышей, дефицитных («нокуатных») по генам ФНО и ЛТ, созданных в нашей лаборатории.  

Подобные работы
Гривенников Сергей Игоревич
Биологические функции фактора некроза опухолей, продуцируемого отдельными видами клеток иммунной системы
Батанова Татьяна Александровна
Создание неиммунной комбинаторной библиотеки одноцепочечных антител человека и получение из этой библиотеки антител против фактора некроза опухоли альфа
Суровцева Елена Владимировна
Методы ДНК-доставки и мониторинга фактора некроза опухолей человека на животных моделях
Круглов Андрей Алексеевич
Функции фактора некроза опухолей, производимого отдельными типами клеток, в аутоиммунитете
Дижур Александр Михайлович
Роль факторов инициации в регуляции трансляции в клетках КРЕБС-2, зараженных вирусом энцефаломиокардита
Брандина Ирина Львовна
Роль белковых факторов и РНК-белковых взаимодействий в импорте тРНК в митохондрии дрожжей
Ветчинова Анна Сергеевна
Расположение и возможная функциональная роль участков связывания транскрипционного фактора CTCF в локусе 19 хромосомы человека
Федорова Виктория Викторовна
Роль лейкемияингибирующего фактора в регуляции роста эмбриональных стволовых клеток и зародышей мыши в культуре
Симонова Мария Александровна
Влияние глюкозаминилмурамоилдипептида на биологическую активность цисплатина и фактора некроза опухолей-
Суровцева Елена Владимировна
Методы ДНК-доставки и мониторинга фактора некроза опухолей человека на животных моделях

© Научная электронная библиотека «Веда», 2003-2013.
info@lib.ua-ru.net